كروماتوجرافيا العمود التقليدي
2. العمود الكوميماري (نوع الدوران)
3. العمود الكوميماني (يدوي)
*** قائمة الأسعار لكامل أعلاه ، استفسرنا عن الحصول على
الوصف
معلمات التقنية
كروماتوجرافيا العمود التقليدييستخدم الفرق في نسب التوزيع للمواد المختلفة بين المرحلة الثابتة والمرحلة المتنقلة ، أو قدرات الاحتفاظ المختلفة للمراحل الثابتة بالنسبة لمواد مختلفة ، لتحقيق فصل المواد. عندما يتدفق الخليط عبر العمود الكروماتوغرافي مع المرحلة المتنقلة ، فإنه سيتفاعل مع المرحلة الثابتة في العمود (مثل الذوبان ، والامتصاص ، وما إلى ذلك). نظرًا للاختلافات في الخواص الفيزيائية والكيميائية والهياكل لكل مكون في الخليط ، يختلف حجم وقوة تفاعلاتها مع المرحلة الثابتة أيضًا. تحت نفس القوة الدافعة ، يختلف وقت الاحتفاظ بكل مكون في المرحلة الثابتة ، بحيث تتدفق المكونات في الخليط من العمود بترتيب معين ، وتحقيق الفصل.
المعلمة
الكشف عن بقايا المبيدات
 |
 |
 |
 |
كثيرا ما نقول ذلككروماتوجرافيا العمود التقليديهو في الواقع فصل كروماتوجرافيا العمود ، والمعروف أيضا باسم كروماتوجرافيا العمود. تم اختراعه واستخدامه لأول مرة من قبل العلماء الروس في عام 1903. لقد سحق محلول أصباغ المزرعة في مسحوق كربونات الكالسيوم ووجدت أشرطة ألوان مختلفة على مسحوق كربونات الكالسيوم من أعلى إلى أسفل. عن طريق فصل واستخراج نطاقات ألوان مختلفة ، تم الحصول على الكلوروفيل النقي نسبيا ، اللوتين ، وما إلى ذلك.
بعد مائة عام من التطوير ، أصبحت هذه الطريقة ناضجة نسبيًا ، وتطورت المرحلة الثابتة أيضًا من مسحوق كربونات الكالسيوم الواحد إلى الألومينا (التي يمكن تقسيمها إلى حمضية ، محايدة ، قلوية) ، هلام السيليكا المنشط ، إلخ.
تحتاج المرحلة الثابتة (هلام السيليكا) عمومًا إلى تنقيتها وتفعيلها ، ويجب أن يكون حجم الجسيمات موحدًا. من الناحية النظرية ، كلما كان حجم الجسيمات أصغر وأكبر مساحة السطح لكل كتلة وحدة ، كلما زادت قدرة الامتزاز وتأثير الفصل بشكل أفضل.
ومع ذلك ، في الاستخدام العملي ، عندما تكون جزيئات الطور الثابتة صغيرة جدًا ، فغالبًا ما تكون هناك حالتان: الأول هو أنهما أخف وزناً في الوزن ويطفو بسهولة في الهواء (لا يمكن أن يتحلل جسم السيليكا بواسطة جسم الإنسان ، وكلما كانت أكثر سمية ، أكثر سمية) ؛ ثانياً ، يمكن أن تؤدي الجزيئات الصغيرة أيضًا إلى فجوات صغيرة بين الجزيئات ، مما يؤدي إلى ارتفاع معدل تدفق المذيبات واستهلاك الوقت ؛ مع أخذ السيليكون كمثال ، فإن أكبر حجم استخدام تجاريًا للسيليكون هو حاليًا 200-300.
من حيث طرق تمرير العمود ، بالإضافة إلى معدات التحليل التلقائي مثل تحضير الدورة الدموية الأمامية ، وإعداد طور سائل فعال ، وآلات تمرير العمود المذكورة سابقًا ، يتم تقسيم تمرير العمود اليدوي إلى ثلاثة أنواع: تمرير عمود الضغط الجوي ، مرور عمود الاكتئاب ، ومرور عمود الضغط.
من بينها ، ينتج عن الاكتئاب من خلال العمود سوء كفاءة الامتزاز بسبب معدل التدفق السريع للمتأرجح ، مما يؤدي إلى فقدان معظم عدد الصواني وسوء كفاءة الفصل. إنه مناسب لفصل العينات باستخدام لوحات TLC مفتوحة نسبيًا ، خاصة بالنسبة للعينات التي تحتوي على شوائب قطبية واحدة فقط في المنتج ؛ يتم قضاء معظم وقتها على ما قبل المعالجة للمركبات ، وإزالة بعض الشوائب قبل التنقية الدقيقة. تجدر الإشارة إلى أن تبخر المذيبات الناجم عن الضغط السلبي أثناء الاستخدام يمكن أن يؤدي إلى تكثيف عدد كبير من قطرات الماء على السطح الخارجي للعمود. لا ينبغي محاولة المركبات الحساسة للماء بسهولة.
إن تمرير عمود الضغط الجوي هو طريقة الفصل الأكثر فعالية بين الثلاثة ، ولكن لأن المذيب غالباً ما يتحرك ببطء شديد ، حتى أن أفضل تأثير فصل يمكن أن يؤثر على الكفاءة. لذلك ، يتم تطبيق الضغط عادة في هذا الوقت ، والذي يسمى تمرير العمود المضغوط ؛ ولكن لا ينبغي أن يكون الضغط مرتفعًا جدًا. بشكل عام ، يتم استخدام كرة سلسلة مزدوجة للتشغيل اليدوي ، ويتم استخدام مضخة السمك للتشغيل التلقائي. يمكن تعديل كلاهما كما هو موضح في الصورة.
عملية عبور العمود التقليدي:
يجب أن يتم العمل بشكل جيد:
عند اختيار عمود ، لاحظ ما إذا كان هناك لوحة رمل. بالنسبة للأعمدة التي لا تحتوي على ألواح الصنفرة ، تذكر أن تملأ القاع ببعض القطن. يجب ألا يكون القطن سميكًا جدًا أو رقيقًا جدًا ، طالما أنه يمكن أن يمنع السيليكون من الخروج. (قام المدون بتفكيك شماعات الملابس مباشرة واستخدمه لإدراج القطن في المخرج على القابس)
قم بإعداد الحد الأدنى من قطبية ، مصباح الأشعة فوق البنفسجية (الموصى به لموظفي المختبر ، باليد ، على استعداد لالتقاط صورة في أي وقت) ، وأجهزة الضغط ، و RACK أنبوب الاختبار حسب الضرورة!
حدد عمودًا مناسبًا ، وأضف هلام السيليكون ، ونقع هلام السيليكون ، وقم بتسطيحه
اختياركروماتوجرافيا العمود التقليديمن المهم للغاية ، ويجب حساب حجمها بناءً على كمية المنتج ، والتي يمكن تقسيمها عمومًا إلى:
بضعة ملليغرام من العمود (الخيار النهائي للتخليق الكلي) ؛
عمود من عدة عشرات من ملليغرام (الركيزة التوسع المنهجي) ؛
500 ملليغرام إلى 1 جرام من العمود (باستخدام المنهجية كمواد خام) ؛
الأعمدة حوالي 5G ومقاييس أكبر.
النسبة الأكثر شيوعًا لقطر العمود إلى الارتفاع في المختبر عمومًا ما بين 1: 2.5 و 1:15. تبلغ كمية هلام السيليكا المستخدمة كمرحلة ثابتة أثناء تحميل العينة حوالي 20 إلى 40 مرة من العينة. يجب أن يعتمد المعيار لتحديد الأعمدة على وضع تسلق لوحة TLC لعينتك. إذا كان هناك العديد من الشوائب على مقربة ، فحاول اختيار عمود أكبر قدر الإمكان ، بحيث يمكن تغطية العينة بطبقة رقيقة صغيرة (السُمك الموصى بها أقل من 5 مم). إذا كانت الشوائب بعيدة ، يمكن زيادة هذا السماكة بشكل طبيعي ، ولكن لا ينصح بأن يتجاوز سمك العينة 2 سم ، ما لم يتم غسل المنتج ببساطة.
يرتكب الكثير من الناس خطأً في التفكير في أن إضافة المزيد من السيليكون ، حتى لو كان أكثر سمكًا على عينة ، فهل يمكن فصله بشكل جيد؟ هذه الإجابة سلبية!
والسبب هو أن هؤلاء الأشخاص لم يفكروا أبدًا في أن العينات أدناه أو فوقها لم تكن تعمل على نفس الخط ، لذلك لم يتمكنوا من الحصول على بعض العوامل النقية فقط ، والتي تم عبور معظمها ، ناهيك عن تلك النجاسة ، تضيع الوقت والمذيبات!
لهذا السبب تتطلب العينة التخفيف!
بعد اختيار العمود ، يمكن إجراء إضافة السيليكون من خلال قمع التغذية. في الوقت نفسه ، تأكد من ارتداء قناع والعمل في غطاء الدخان. لن يتم وضع سبب ذلك من قبل المدون (السيليكات).
أما بالنسبة لتسلل هلام السيليكا ، فإن العملية الموصى بها هي: أولاً ، ضع عمود هلام السيليكا مع هلام السيليكا المثبت رأسياً ، وتسطيح سطح هلام السيليكا بيدك ، وتوصيل قاع عمود هلام السيليكا بمضخة مائية ، وضخ جل السيليكا ، ثم صب في أقل استقطاب من أعلاه. عندما يكون Eluent على وشك التسرب ، أغلق صمام الإغلاق لمنع ضخ المذيب في مضخة المياه.
بعد ذلك ، تحت الضغط ، يمكن أن يكون هلام السيليكون غارقًا بشكل موحد عن طريق تدفق سبعة أو ثمانية مجلدات أعمدة مع أصغر كمية من العامل النامي.
عينة أعلاه
تنقسم أخذ العينات إلى أخذ عينات رطبة وأخذ العينات الجافة.
(1) أخذ العينات الرطب.
تتمثل الطريقة الموصى بها في استخدام ماصة مع طرف مطاطي لامتصاص العينة ، بالقرب من القسم العلوي من هلام السيليكون ، بالتنقيط ببطء وبشكل متساوٍ حتى يغطي طبقة ، ثم توقف عن إضافة العينة وتطبيق بعض الضغط لإغراق المادة الزيتية في طبقة هلام السيليكون ؛ انغمس في المادة الدهنية في طبقة السيليكون وكرر هذه العملية عدة مرات حتى يتم تحميل جميع العينات!
قد يكون بعض الطلاب الجدد فضوليين لماذا يتم تنفيذ هذه العملية بدلاً من طلاء زيت العملية الرطبة مثل المادة في وقت واحد؟
في الواقع ، يمكن أن تقلل هذه العملية من الارتفاع الفعال لطبقة العينة. في هذه المرحلة ، بدأت كروماتوجرافيا العمود بالفعل ، والعينات اللاحقة تشبه المذيبات التي تدفع العينات السابقة إلى adsorb و desorb في هلام السيليكا.
(2) أما بالنسبة لأخذ العينات الجافة.
ما لم يكن ذلك ضروريًا للغاية ، لا ينصح به. ينصح بالعينات الصلبة للضرب أو تبلور. "الطرق عديمي الضمير ، يوصى بتبلور التذبذب بالموجات فوق الصوتية من الزيت الغليان" و "مشاركة طريقة إعادة التبلور في المختبر".
أخذ العينات الجافة بشكل عام يجلب مشكلتين ؛ من ناحية ، أثناء عملية خلط العينة ، تزداد إمكانية التفاعل بين العينة والهلام السيليكا بسبب الحاجة إلى رفع درجة حرارة التبخر الدوار ؛ من ناحية أخرى ، يعني التحميل الجاف أنه سيتم إدخال المواد الممتازة في طبقة العينة ، مما يزيد من ارتفاع طبقة العينة أو حجم العمود ، مما يتطلب المزيد من الوقت والمذيب.
إذا لم يكن هناك خيار آخر ، فما عليك سوى صب المسحوق الممتص ببطء في العمود للتحميل ، مع بعض المتطلبات المشابهة للطرق الرطبة.
أضف كبريتات الصوديوم اللامائية أو رمال الكوارتز
من أجل تجنب التأثير على طبقة العينة أثناء إضافة الحضور ، مما يؤدي إلى عدم وجود تشويه ، وتشوه ، وتأثير كفاءة الفصل ، يتم وضع طبقة من كبريتات الصوديوم اللامائية أو رمل الكوارتز على أعلى طبقة العينة.
يفضل مهندسونا شخصياً وضع كبريتات الصوديوم اللامائية لأنه يحتوي أيضًا على وظيفة تجفيف وصديقة للمذيبات مثل ثنائي كلورو ميثان ، والتي تعرض للتطابق وامتصاص الحرارة والتكثيف!
شطف التدرج ، وأخذ العينات وجمع
بعد التحميل ، قم أولاً شطف العمود باستخدام مذيب قطبي صغير (مذيب لن يسمح للمنتج بالمرور) من أجل أحجام العمود 2-3 (يتم تعريف وحدة تخزين عمود واحدة على أنها حجم المرحلة المتنقلة المتدنية إلى داخل وخارج) لضمان التوحيد ، ثم تحديد نسبة للاشتعال.
كيف تختار الفتاة التي تمر عبر العمود؟
نسبة Eluent هي النسبة عندما يصل منتجك إلى قيمة RF تبلغ حوالي 0. 2 على لوحة TLC
هذه هي تجربة غسل الأعمدة التي قرأتها العديد من الكتب ومشاركتها ، والعملية الفعلية متشابهة أيضًا. أنا شخصياً أفضل تقليل التدرج بمقدار مرتين.
على سبيل المثال ، إذا كان المذيب لتسلق لوحة TLC هو PE/ea =2: 1 ، فمن المرجح أن يبدأ المدون شطف التدرج من PE/ea =4: 1 وينتهي عند PE/ea =2: 1 ، بشكل عام في نتائج أفضل.
هناك أيضا تقنيات عند جمع enuent. يمكنك أولاً اختيار أنبوب اختبار أكبر لاستلامه ، وعندما تقترب TLC من النقطة المستهدفة ، قم بالتبديل إلى أنبوب اختبار أصغر. هذا يمكن أن يقلل من إمكانية تلقي المزيد وتجنب الشوائب.
إذا واجهت مواقف حيث تكون نقاط الشوائب ونقاط المنتج قريبة من بعضها البعض ، خاصة تلك ذات التألق الضعيف ، تذكر عدم ممارسة الضغط. بدلاً من ذلك ، اختر تمرير العمود تحت الضغط العادي ، وقم بتغيير الأنبوب في كل مرة يتم توصيل أنابيب نصف أو أقل ، والتي يمكن أن تزيد أيضًا من احتمال التنقية.
تذكر عدم التعامل مع العمود في الوقت المناسب!
كثير من الناس لديهم عادة افتراض أن العمود قد تم تمريره وتجفيفه عندما لا يكون هناك منتج في أنبوب واحد أو اثنين بعد TLC في المرحلة اللاحقة.
أدركت فقط أن العائد كان منخفضًا جدًا عندما قمت بحساب ذلك ، أو عندما ذهبت لصنع طيف ، وجدت أن الطيف كان غير صحيح وغاب عن النقطة الخاطئة. أنا أسفها بعمق.
لذلك يوصى بعدم التسرع في معالجة العمود بعد الانتهاء من النقطة المطلوبة. بدلاً من ذلك ، قم بإجراء الرنين المغناطيسي النووي لمطابقة العائد قبل المعالجة.
إذا كنت مشغولاً أو في عجلة من أمرك لتنقية المركبات الأخرى مع هذاكروماتوجرافيا العمود التقليدي، يوصى بشطفه مع مذيب مختلط حميد عالي الاستقطاب ويترك هذا الجزء من الحجم بشكل منفصل لنتائج تحديد الهوية.
الوسم : كروماتوجرافيا العمود التقليدي ، مصنعي كروماتوجرافيا الأعمدة التقليدية في الصين والموردين والمصنع
زوج من
عمود كروماتوجرافيا صغيرةفي المادة التالية
كروماتوجرافيا العمود الكلاسيكيإرسال التحقيق
